Лаборатория НЕЙРОГЕНЕТИКИ И ГЕНЕТИКИ РАЗВИТИЯ

Руководитель группы - Галина Валериевна ПАВЛОВА, д.б.н., профессор, lkorochkin@mail.ru

Сотрудники и аспиранты группы нейрогенетики и генетики развития:

Александр Владимирович РЕВИЩИН – старший научный сотрудник

Елена Андреевна МОДЕСТОВА – младший научный сотрудник

Дмитрий Юрьевич ПАНТЕЛЕЕВ – младший научный сотрудник

Николай Андреевич ПУСТОГАРОВ- младший научный сотрудник

Екатерина Анатольевна САВЧЕНКО- младший научный сотрудник

Надежда Николаевна КУСТ – старший лаборант-исследователь

Ольга Дмитриевна МАТВЕЕВА- аспирант

Леонид Иванович КОРОЧКИН

Tel.: (499)135-25-41, (499)135-99-56, (499)135-97-83;
E-mail: lkorochkin@mail.ru

Вакансии: аспирант

Краткая история лаборатории

Лаборатория нейрогенетики и генетики развития основана в 1991 году известным нейрогенетиком Леонидом Ивановичем Корочкиным, который был ее руководителем до 2006 года. С 2006 года лаборатория реорганизована в группу, руководителем, которой стала Г.В.Павлова. За это время своего существования лаборатория выучила, защитила и выпустила «в свет» множество учеников. Многие из них сейчас работают за рубежом, среди них есть даже заведующие лабораториями. В разные годы коллектив имел контакты с институтом цитологии и генетики (Новосибирск), Упсальским Университетом, Каролинским Университетом, Московским Государственным Университетом имени М.В. Ломоносовым, и многими другими организациями.

Тематика исследований
(гипотеза)

Очевидно, что индивидуальное развитие регулируется иерархически организованной системой генных ансамблей. Огромную роль в управлении клеточной дифференцировкой играют “master” гены, от которых зависит специфика развития определенной ткани или органа. Такого типа гены запускают каскады экспрессии структурных генов, обеспечивающих синтез тканеспецифических белков. Таким образом, изменение экспрессии ключевых генов, может изменить дифференцировку не только клетки, но и всей ткани. Мы предполагаем, что при использовании “master” генов можно получать стабильную необратимую нейральную дифференцировку и таким образом управлять восстановительными процессами при нейродегенеративных заболеваниях. Кроме того, использование основных положений этой гипотезы может позволить создать комплексные трансгенные клеточные препараты способные противодействовать росту опухолей, чрезмерной гибели клеток и образованию глиофибриллярного рубца.

Целью работ группы является поиск и изучение эволюционно консервативных систем, управляющих нейрогенезом. Задачей является анализ их роли в регуляции нейрогенеза и выявление общих для различных животных принципов регуляции нейрогенеза и форм патологии, обусловленных нарушением этой регуляции.

Основные научные открытия (достижения) лаборатории

За время существования лаборатории, был получен ряд существенных результатов, как в области фундаментальной молекулярной и клеточной биологии, так и имеющих прикладное значение:

  1. Получены трансгенные линии мух, продуцирующие человеческий нейротрофический фактор GDNF. Стволовые нейральные клетки, выделенные из эмбрионов таких мух, блокируют образование глиального рубца при ксенотрансплантации в мозг млекопитающих. Данная разработка поможет решить проблему образования рубца при трансплантациях, показанных при нейродегенеративных заболеваниях человека.
  2. Исследован новый нейроген sip-1, контролирующий развитие нервных клеток коры головного мозга млекопитающих.
  3. Был разработан способ управления ростом нервных отростков спинального ганглия млекопитающих в строго определенном, заданном направлении. При этом были использованы трансгенные эмбриональные нервные клетки дрозофилы, продуцирующие человеческие нейротрофические факторы. Данное исследование будет полезно, при восстановлении нарушенной иннервации у человека.
  4. Показано, что супрахориодальное введение стволовых мезенхимальных клеток и обкладочных клеток обонятельного нерва уменьшают размеры участков дегенеративных изменений в сетчатке, пораженной путем лазерной коагуляции
  5. Разработаны способы индукции стромальных клеток жировой ткани (СКЖТ), которые позволяют стимулировать нейральную дифференцировку первичных клеточных культур. Обнаружено, что наиболее действенными индукторами нейральной дифференцировки оказались сочетания BDNF с 5-азацитидином и ретиноевой кислоты с 5-азацитидином. Именно эти два сочетания факторов вызывают активацию экспрессии маркерных генов нейральной дифференцировки в СКЖТ.
  6. Обнаружена возможность использования промоторов дрозофилы для регуляции экспрессии в клетках млекопитающих чужеродных генов, полезных при лечении некоторых, в частности, нейродегенеративных, заболеваний.
  7. RAPD-PCR -анализом обнаружена индивидуальная изменчивость геномной ДНК в культурах прогениторных клеток человека в зависимости от увеличения количества пассажей. Данный метод можно предложить для контроля генетической стабильности клеточного материала.
  8. Обнаружена новая популяция кальретинин-позитивных, предположительно, не нейрональных клеток с полиморфными шипиками в переднем мозге мышей, локализующаяся вблизи с пролиферативной зоной бокового желудочка. Показано, что клетки появляются в раннем постнатальном онтогенезе.
  9. Определение роли генов D4/Dpf1/Dpf2/Dpf3-(double-paired Zn-fingers) в формировании и функционировании ЦНС. В процессе дифференцировки клеток-предшественников в постмитотические нейроны происходит изменение субъединичного состава этих комплексов, в частности замена белка BAF45а /PHF10 на белки, кодируемые нейроспецифическими генами d4: Dpf1 (BAF45b) и (или) Dpf3 (определенной изоформой, известной как Cer-d4-XZ или BAF45c). Таким образом формируется нейрональный комплекс nBAF, который специфичен для дифференцированных постмитотических нейронов (Lessard J. и др.). Однако роль этих генов в индивидуальном развитии организма и отдельных его органов и тканей, в частности нервной ткани, до сих пор остается не ясной. Направленная инактивация neuro-d4/Dpf1 и cer-d4/Dpf3 у мыши, привела к нарушению врожденных поведенческих реакций.
  10. Показано, что прогениторные клетки, полученные из жировой клетчатки человека или мыши способны к необратимой дифференцировке в нейральном направлении. Было обнаружено, что при трансплантации прогениторных клеток, полученных из подкожного жира и диффереренцированных в нейральном направлении под воздействием BDNF, снижается образование глиального рубца и клетки мигрируют в паренхиму мозга.
  11. Влияние неонатальных изменений уровня нейрогенеза на поведенческие характеристики подопытных животных в норме и патологии. В работе исследуется влияние искусственного повышения уровня неонатального нейрогенеза на уровень двигательной и исследовательской активности, обнаруживаемые у взрослых животных в специальных тестах. Для повышения уровня нейрогенеза используется системное или интраназальное введение ингибитора синтазы окиси азота L-NAME. Это вещество при обоих видах введения вызывало увеличение количества делящихся нейронов в нейрогенных областях – зубчатой фасции гиппокампа и субвентрикулярном слое боковых желудочков. Показаны последствия данного неонатального воздействия выражающиеся в достоверных и генотип-зависимых сдвигах в уровне двигательной и исследовательской активности, обнаруживаемых у взрослых животных в специальных тестах.
  12. RAPD-PCR -анализом обнаружена индивидуальная изменчивость геномной ДНК в культурах прогениторных клеток человека в зависимости от увеличения количества пассажей. Данный метод можно предложить для контроля генетической стабильности клеточного материала.

Основное направление исследований:

Влияние трансгенных нейротрофических факторов на развитие нейральной ткани.
Куст Н.Н., Мерцалов И.Б., Рыбалкина Е.Ю., Ревищин А.В., Павлова Г.В.

Нами было показано, что эмбриональные нервные клетки дрозофилы переживают и дифференцируются после трансплантации в мозг развивающихся амфибий, а также в мозг взрослых млекопитающих – крыс и мышей. В связи с этим в группе было проведено исследование возможности использования эмбриональных нервных клеток дрозофилы, экспрессирующих трансгенные нейротрофические факторы, для управления дифференцировкой и развитием нервной ткани млекопитающих. Для этой цели проводили эксперименты по ко-культивированию эмбриональных спинальных ганглиев крысы с фрагментами нервной ткани эмбрионов дрозофилы в геном которых введены гены нейротрофических факторов млекопитающих: NGF – фактора роста нервов, GDNF – глия производного нейротрофического фактора, BDNF- мозг производного нейротрофического фактора. Конструкции, содержащие упомянутые гены под контролем промотора белка теплового шока 70, делали на основе вектора pCaSper-act, и затем вводили в геном дрозофилы линии D. melanogaster Df(1)w67c23(2) посредством инъекции в эмбрионы мухи. Затем были выведены линии дрозофилы гомозиготные по гену нейротрофического фактора. Функциональная активность генов была подтверждена посредством саузерн и вестерн-блот анализов. Для проведения экспериментов выделяли и помещали в культуру спинальные ганглии эмбрионов крыс или новорожденных крысят. По соседству помещали фрагменты эмбриональной нервной ткани дрозофилы, несущие трансгены NGF, GDNF и BDNF. В контрольных экспериментах подсаживали ткань нетрансфицированных дрозофил. В эксперименте наблюдали направленное прорастание волокон из спинального ганглия к трансгенной ткани дрозофилы, которое начиналось уже через 1-2 часа кокультивации. В дальнейшем прорастающие волокна опутывали ткань дрозофилы. В контроле ненаправленное прорастание волокон спинального ганглия наблюдали только на 3-4 -й день культивации. В этих опытах показано, что присутствие трансгенных нейротрофических факторов NGF, GDNF и BDNF. стимулирует прорастание отростков нервных клеток спинальных ганглиев.

Также было исследовано выживание аллогенных клеток дорзального ганглия крыс эмбриональных возрастов Е15 и Е20 после их ортотопической трансплантации взрослым крысам, а также влияние на этот процесс фактора NGF. NGF доставляли к пересаженным клеткам или инфузии или посредством котрансплантации клеток выделенных из трансгенных D. melanogaster, несущих ген человеческого NGF. Поясничные дорзальные ганглии взрослых крыс удаляли и на место удаленных пересаживали эмбриональные Е15 и Е20 ганглии. Было обнаружено, что инфузия NGF в течение 2 недель приводила к увеличению выживаемости Е15, но имела негативный эффект на выживаемость клеток из Е20, а также, что котрансплантированные на место дорзальных ганглиев клетки дрозофилы выживали и оказывали позитивныое влияние на выживание GSA- и CGRP-позитивные популяции E15 и E20 трансплантатов. Таким образом, трансгенные клетки дрозофилы можно пересаживать совместно с эмбриональной нервной тканью в периферическую нервную систему млекопитающих для увеличения выживаемости пересаженных клеток.

Влияние гиперэкспрессии нейротрофических факторов на снижение
образования глиального рубца при ксенотрансплантациях.

Куст Н.Н., Мерцалов И.Б., Ревищин А.В., Павлова Г.В.

Клетки линии НЕК-293 (Human embryonic kidney) были трансфицированы конструкцией, содержащей ген глия производного нейротрофического фактора (gdnf) на основе вектора pEGFP-N1, содержащий ген зеленого флуоресцентного белка (gfp) под CMV промотором. Клетки трансплантировали взрослым мышам линии СВА. В полосатое тело мозга животных опытных групп вводили клетки, продуцирующие химерный белок GDNF/GFP, а животным контрольных групп – клетки, содержащие ген gfp и продуцирующие соответствующий белок. Иммуногистохимическая окраска на глиальный кислый фибриллярный белок и на белковые маркеры рубцовой ткани (коллаген, актин, фибронектин) срезов мозга мышей, проживших после трансплантации через 8 дней, показал, что присутствие трансгенного gdnf в трансплантированных клетках уменьшает глиальную посттравматическую реакцию окружающей трансплантат ткани мозга. Полученные результаты говорят о том, что клетки линии НЕК293, содержащие чужеродные гены способны длительно переживать в мозгу мышей реципиентов. При этом не наблюдается признаков трансформации фенотипа трансплантированных клеток в мозгу реципиента.Результаты подтверждают перспективность применения GDNF в качестве нейропротектора в тканевой терапии.

Использование промотора гена белка теплового шока дрозофилы hsp70,
в качестве регуляторного элемента при введении чужеродных
генов в клетки млекопитающих.

Куст Н.Н., Мерцалов И.Б., Рыбалкина Е.Ю., Ревищин А.В., Павлова Г.В.

Для успешного применения генной и клеточной терапии полезно иметь конструкции, с управляемой экспрессией трансгенного продукта. В нашей лаборатории была создана конструкция, содержащая промотор гена белка теплового шока дрозофилы (hsp70). Полученная конструкция, содержащая репортерный ген синего флуоресцентного белка (СФБ) под промотором hsp70 дрозофилы, была введена в геном эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) мышей. Клетки, трансфицированные геном СФБ под контролем hsp70 промотора дрозофилы в обычных условиях не светятся. Однако после предварительного температурного шока, полученного прогреванием культуры ЭСК при 40оС в течение 30 минут трансформированные клетки обнаруживали выраженное голубое свечение, воздействие температуры 40оС разрушало комплекс HSF/HSP90. Далее было обнаружено, что при введении в клетки мыши, с трансгеном СФБ под hsp70 промотором дрозофилы, еще и конструкции несущей ген дрозофилы hsp83 под контролем CMV промотора наблюдалось постоянное свечение голубого белка в трансфицированных клетках при температуре 37оС. Таким образом, обнаружена возможность использования промоторов дрозофилы для регуляции экспрессии в клетках млекопитающих чужеродных генов, полезных при лечении некоторых, в частности, нейродегенеративных, заболеваний.

Получение культуры клеток дрозофилы, экспрессирующей
нейротрофический фактор млекопитающих.

Пантелеев Д.Ю., Павлова Г.В.

Для исследования влияния трансгенных нейротрофических факторов на дифференцировку клеток in vitro и после трансплантации в мозг была поставлена задача получения культуры клеток дрозофилы, экспрессирующей нейротрофический фактор млекопитающих. Для данной работы была использована линия дрозофилы D. melanogaster Df(1)w67c23(2). Конструкция, содержащая нейральный ген ngf (фактор роста нервов) под хитшоковым промотором дрозофилы, создана на основе вектора pCaSper-act. Конструкция была введена в геном мухи посредством инъекции в эмбрионы дрозофилы линии D. melanogaster Df(1)w67c23(2). Затем были выведены линии дрозофилы гомозиготные по введенному трансгену. Эмбриональные клетки данной линии были использованы для получения культуры клеток дрозофилы. Полученная культура заметно отличалась по фенотипу от обычных линейных культур клеток дрозофилы. Вызванная тепловым шоком (37оС) экспрессия гена ngf приводит к резкому изменению фенотипа клеток, их агрегативных свойств и, по-видимому, стимулирует дифференцировку клеток дрозофилы в нейральном направлении. Данную систему можно использовать в экспериментах по изучению влияния тарнсгенов нейротрофических факторов на дифференцировку клеток в культуре и при трансплантациях этих клеток в мозг млекопитающих. Преимущество такого материала состоит в том, что культура клеток дрозофил является более чистой для культуральной работы и для трансплантаций, чем использовавшиеся ранее фрагменты ткани эмбрионов дрозофилы.

Изучение влияния трансплантации мезенхималных стволовых клеток
и обкладочных клеток обонятельного эпителия на посттравматические
явления в сетчатки кролика.

Ревищин А.В., Павлова Г.В. (совместно с каф. ВНД, Биофак МГУ)

По данным литературы известно протективное и восстановительное действие мезенхимальных стволовых клеток (МСК) и обкладочных клеток обонятельного эпителия (ОК) после их трансплантации в области повреждения нервной системы млекопитающих. Применение упомянутых клеток в клеточной терапии дегенеративных заболеваний мозга и глаза особенно привлекательно, из-за возможности применения для лечения аутологичных клеток т.е. клеток, полученных от пациента. Эта возможность снимает целый ряд иммунологических и моральных проблем, сопутствующих перспективе применения клеточной терапии. На модели лазерной коагуляции сетчатки исследовано влияния внутриглазных инъекций МСК и ОК на дегенеративные процессы после лазерной коагуляции сетчатки кроликов. Гистологические и иммуногистохимические исследования показали отсутствие осложнений от введения МСК и ОК, а также статистически достоверное уменьшение площади дегенерации под влиянием супрахориоидальных инъекций этих двух типов клеток Положительный эффект введения клеток подтвержден физиологическими исследованиями электроретинограммы подопытных животных. Результаты предклинических экспериментов показали безопасность и перспективность применения МСК и ОК в лечении дегенеративных заболеваний сетчатки глаза.

У всех исследованных животных, подвергшихся введению мезенхимальных стволовых клеток, средний размер зон первичного поражения в опытном глазу был меньше, чем в контрольном. У трех животных различия были статистически достоверны по критерию Стьюдента (P<0,01). Средняя величина поражений для всех опытных глаз была меньше, чем средняя величина поражений для всех контрольных. Это различие было статистически достоверно по критерию Стьюдента (P<0,01). Результаты измерений свидетельствуют о том, что супрахориоидальная трансплантация МСК способствует сохранению функциональной активности сетчатки при моделировании ее лазерного повреждения. Результаты электроретинографических исследований свидетельствуют о наличии нейропротекторного эффекта, наиболее выраженного для функции фоторецепторов. Супрахориоидальная трансплантация мезенхимальных стволовых клеток приводит к уменьшению дегенеративных изменений после лазерного поражения сетчатки.

Результаты супрахориоидального введения мезенхимальных стволовых клеток обонятельного эпителия взрослого человека в глаз кролика, подверженного лазерной коагуляции. У всех пяти кроликов средние размеры зон поражения в опытном глазу были меньше, чем в контрольном. Различия были достоверны только для общих средних размеров поражений у всех подопытных животных (*).

Управление нейральной дифференцировкой стромальных клеток жировой ткани.
Ревищин А.В., Рыбалкина Е.Ю., Павлова Г.В.
(Совместно с факультетом фундаментальной медицины
Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова,
с Институтом канцерогенеза РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН)

Были получены культуры прогениторных клеток из жировой ткани человека и мыши. На полученные клеточные культуры воздействовали нейротрофическими факторами и ретиноевой кислотой. Было обнаружено, что мозг-производный нейротрофический фактор (BDNF) в сочетании с 5-азацитидином стимулирует дифференцировку прогениторных клеток, полученных из жировой ткани, в нейральном направлении. Затем клетки, обладающие нейральными характеристиками трансплантировали в головной мозг мыши в полосатое тело. Было обнаружено, что индуцированные клетки мигрировали в паренхиму мозга и при этом снижалось образование глиального рубца на границе трансплантата. Тогда как в случае трансплантации контрольных неиндкцированных клеток наблюдалось формирование обширного рубца вокруг трансплантата, выявляемого иммуногистохимическими реакциями на фибронектин и на кислый глиальный фибриллярный белок. Неиндуцированные прогениторные клетки жирового происхождения не обладали миграционной способностью. Будучи трансплантированы в мозг они формировали четко очерченный клубок, окруженный плотным кольцом астроцитарной глии, формирующей глиофибриллярный рубец. Таким образом, трансплантация СКЖТ, которые были индуцированы с помощью разработанных нами процедур, может являться перспективным подходом для клеточной терапии нервной ткани.

Относительное количество GFP-позитивных клеток на срезах мозга мышей.
Средняя площадь GFP-позитивной области на поле зрения, посчитанная по уровню
зеленой флуоресценции (n=15, * - p<0,05 по сравнению с контролем).

Мышиные СКЖТ, содержащие GFP, трансплантированные в головной мозг мыши после воздействия эндотелина 1 через 7 дней после трансплантации. А – контрольные клетки держатся локальной группой в месте инъекции. Б – клетки индуцированные смесью 5-азацитидина и ретиноевой кислоты мигрируют в окружающую ткань ишемизированного мозга. Масштаб 0,5 мм.

Исследование индивидуальной изменчивости геномной ДНК в культурах прогениторных клеток.
Ревищин А.В., Рыбалкина Е.Ю., Павлова Г.В.
(совместно с лабораторией Организации генома ИБГ РАН)

Разработан молекулярно-генетический метод, позволяющий паспортизировать и контролировать генетические изменения в клеточных культурах млекопитающих при различной длительности пассирования. Тест-система основана на применении RAPD-PCR анализа ДНК. Особенность предложенной тест-системы заключается в подборе определенного набора случайных праймеров, способных контролировать генетические изменения в клеточных культурах млекопитающих при длительном культивировании. Контроль генетической изменчивости проводится на основании сравнения геномного профиля (полученного при помощи RAPD-PCR анализа ДНК) клеток нулевого пассажа (или прошедших первый пассаж) с геномным профилем клеток после длительного культивирования. Исследование проводят по стандартной методике RAPD-PCR анализа ДНК, используя несколько олигонуклеотидных праймеров P29, R45 и 447.

Оригинальность использования предложенного метода заключается в возможности контроля методом RAPD-PCR анализа ДНК генетических изменений в клеточных культурах при длительной культивации, а также возможность паспортизации исследуемых культур. Данный метод быстр, прост в использовании и не несет значительных затрат. Отсутствие использования радиоактивных материалов при паспортизации можно также отнести к преимуществам такой тест-системы. При этом в отличие от других методов контролируется постоянство не отдельных генов а всего генома.

Изучение влияния нейропептида семакса на пролиферативную
активность в переднем мозге крысы.

Ревищин А.В., Павлова Г.В. (совместно с каф. ВНД, Биофак МГУ)

В работе было использовано 34 крысы линии КМ и Вистар. Семакс (Центр термобиотехнологии и молекулярной диагностики ИМГ РАН, Москва) вводили крысятам подкожно в область холки в дозировке 50 мк/кг ежедневно. Оценку уровня нейрогенеза в каждой из этих групп проводили в два срока – сразу после прекращения неонатального введения семакса и через 10 дней после прекращения инъекций.

Для оценки интенсивности пролиферации в зубчатой фасции гиппокампа использовалось иммуногистохимическое окрашивание с использованием антител к специфическому белку делящихся клеток – Ki-67(NovoCastra, США). Подсчет клеток зубчатой фасции гиппокампа производили на серии фронтальных срезов, содержащих дорсальный отдел этой структуры.

Неонатальное введение семакса крысам обоих генотипов значительно повышает число клеток, иммунопозитивных к Ki-67, в зубчатой фасции гиппокамповой формации. Среднее число иммунопозитивных к Ki-67 клеточных элементов у животных опытной группы примерно в два раза выше, по сравнению с контролем. Данный эффект семакса сохраняется и после прекращения инъекций, т.е. в возрасте 25-30 дней. Таким образом, введение семакса вызвало изменение числа новых клеточных элементов в пролиферативной зоне зубчатой фасции гиппокампа.

Функции гена Sip 1 в развитии коры головного мозга.
Мерцалов И.Б., Павлова Г.В.

Была изучена экспрессия гена Sip 1 в эмбриогенезе. Начиная с 12-го дня эмбрионального развития мыши, транскрипты Sip 1 присутствуют в ряде структур центральной нервной системы: кортикальная пластинка головного мозга, вентрикулярная зона базального ганглия, таламус, варолиев мост, средний мозг, специфические ядра ствола мозга и дорзальная часть спинного мозга. Во взрослой ткани мозга экспрессия Sip 1 обнаруживается в гиппокампе, зубчатой извилине и белом веществе. В коре головного мозга экспрессия Sip 1 обнаруживает региональную специфичность. Мыши с инактивированным геном Sip 1 в неокортексе характеризуются отсутствием медиальной части коры. Посредством анализа экспрессии генов и морфологии мозга установлено, что при отсутствии Sip 1 зоны гиппокампа нормально специфицируются в ходе развития. Посредством окрашивания по протоколу TUNEL был выявлен высокий уровень клеточной гибели в ткани гиппокампа у мышей, мутированных по гену Sip 1. Данные результаты доказывают важность выполняемой геном Sip 1 функции для нормального развития гиппокампа и зубчатой извилины.

Обнаружена новая популяция кальретинин-позитивных, предположительно,
не нейрональных клеток с полиморфными шипиками в переднем мозге мышей.

Ревищин А.В., Павлова Г.В.

С помощью иммуногистохимической окраски исследовали локализацию кальретинин позитивных клеток на фронтальных срезах передней части больших полушарий мозга мыши. В области передних рогов боковых желудочков мозга выявлена ранее не описанная популяция клеток характерного строения. Клетки имеют мелкие (8-10 микрометров) округлые тела, от которых отходят 1, редко - 2 узловатых отростка, несущие редкие полиморфные шипики (PS) и неправильной формы утолщения. Относительно толстые первичные отростки ветвятся на более тонкие, также формирующие утолщения и шипики различного калибра и строения. кальретинин позитивные шипиковые (CR+PS) клеточные элементы располагаются в белом подкорковом веществе, в слое VI, значительно реже в слое V фронтальной области дорзомедиальной коры по соседству с пояском. Кроме того, CR+PS клетки присутствуют в ростро-дорзальной части комплекса хвостатое ядро-скорлупа, в переднем обонятельном ядре, в субэпендимальном слое дорзо-латерального угла бокового желудочка и реже, у дорзальной его стенки. В отличие от мозга мышей, CR+PS клетки в мозге других животных (крыс, кроликов, кошки) отсутствовали. В CR+PS клетках также не обнаружено солокализации кальретинина с ГАМК и другими нейрональными и глиальными маркерами. Авторы заключают, что найденные клетки представляют, ранее неизвестный, вероятно, не нейрональный тип клеток переднего мозга мышей.

Исследованы новые кальретинин-позитивные клетки с полиморфными
шипиками в переднем мозгу мышей в раннем постнатальном онтогенезе.

Ревищин А.В., Павлова Г.В.

У взрослых мышей, с помощью иммуногистохимического выявления кальретинина в структурах переднего мозга, прилежащих к переднему рогу бокового желудочка нами была описана (Morphology, 2009, v. 135, № 3, р. 7-19) популяция ранее неизвестных моно- и биполярных клеток, тела и отростки которых покрыты полиморфными шипиками (PS). В настоящей работе мы изучили распределение этих клеток у 7-дневных мышат. При сравнительном топографическом анализе дефинитивных и ранних CR+PS клеток установлено что у 7-дневных мышат CR+PS клетки отсутствуют в местах их локализации у взрослых животных – переднем обонятельном ядре, корковой пластинке и внутренней части неостриатума. Вместе с тем, в небольшом количестве CR+PS-подобные клетки в этом возрасте выявляются внутри рострального миграционного пути, у передней границы неостриатума, вдоль дорзальной границы неостриатума с мозолистым телом, в субэпендимальном слое латеральной стенки бокового желудочка и в области пояскового пучка. Эти данные указывают на возможность постнатального происхождения CR+PS клеток. С целью проверки этой гипотезы были проведены эксперименты по постнатальному введению бромодеоксиуридина (BrdU) мышатам в возрасте 2-4 дня с последующим исследованием срезов мозга этих животных, зафиксированных в возрасте 20 дней. Двойное иммуномечение срезов на кальретинин и BrdU показало наличие CR+PS клеток, содержащих постнатально введенный BrdU. Полученные данные доказывают, что, по крайней мере часть CR+PS клеток проходят митоз в постнатальном возрасте. По всей вероятности, в период с 7-го до 20-го дня постнатального развития CR+PS клетки мигрируют в места их взрослой локализации.

Изучение влияния температуроиндуцируемых генов на регенерацию у ящериц Hemidactylus.
Пантелеев Д.Ю., Павлова Г.В.

Способностью восстанавливать утраченные части тела (эпиморфозом) среди высших позвоночных обладают исключительно пойкилотермные животные, хотя и в разной степени. Настоящим исследованием планируется подтвердить предположение, согласно которому гены, участвующие в ответе на понижение температуры у млекопитающих (холод-индуцируемые белки (ХИБ)), принимают непосредственное участие в регенерации у рептилий. К группе ХИБ относят эволюционно консервативные белки CIRBP и RBM3, экспрессирующиеся в клетках млекопитающих при понижении температуры до 32 С, которая является пермиссивной для рептилий. Показано, что гены указанных белков также гиперэкспрессированы в некоторых опухолях, на основании чего их выделяют в новую группу протоонкогенов. В данной работе проводится клонирование генов CIRBP и RBM3 и изучение их роли в процессе восстановления хвоста у ящериц Hemidactylus.

«Звездчатые» структуры, обнаруженные на поверхности клеток, культивируемых при «мягкой» гипотермии (28-32С).

Список публикаций:

2008:

  1. Revishchin A.V., Korochkin L.I., Okhotin V.E., and Pavlova G.V. Neural Stem Cells in the Mammalian Brain. International Review of Cytology. 2008; 265:161-175.
  2. E.Savvateeva-Popova., A.Popov., A.Grossman, E.Nikitina, A.Medvedeva, D.Molotko, N.Kamyshev, K.Pyatkov, O.Zatsepina, N.Schostak, E.Zelentsova, G.Pavlova, D.Panteleev, P.Riederer and M.Evgen`ev. Non-coding RNA as a trigger of neuropathologic disorder phenotypes in transgenic Drosophila. Journal of Neural Transmission. 2008; 115(12):1629-42.
  3. Galoyan AA, Korochkin LI, Rybalkina EJ, Pavlova GV, Saburina IN, Zaraiski EI, Galoyan NA, Davtyan TK, Bezirganyan KB, Revishchin AV. Hypothalamic proline-rich polypeptide enhances bone marrow colony-forming cell proliferation and stromal progenitor cell differentiation. Cell Transplant. 2008;17(9), pp.1061-6.
  4. Тахчиди Х.П., Гаврилова Н.А., Ланевская Н.И., Тищенко О.Е, Сабурина И.Н., Сергеев С.А., Павлова Г.В., Рыбалкина Е.Ю., Ревищин А.В. Влияние Авастина и фактора пигментного эпителия (PEDF) на состояние органотипических культур сетчатки // Объединенный медицинский журнал. 2008: 43-48.
  5. Лопатина Т.В., Н.И.Калинина, А.В.Ревищин, А.А.Беме, И.А.Спирова, Г.В.Павлова, Е.В.Парфенова, Индукция нейральной дифференцировки стромальных клеток жиро-вой ткани, Клеточная трансплантология и тканевая инженерия, 2008;3, 4: 50-55.
  6. Akesson E, Sandelin M, Kanaykina N, Aldskogius H, Kozlova EN. Long-term survival, robust neuronal differentiation, and extensive migration of human forebrain stem/progenitor cells transplanted to the adult rat dorsal root ganglion cavity.Cell Transplant. 2008;17(10-11):1115-23.

2009:

  1. Koles K., Repnikova E., Pavlova G., Korochkin L.I., Panin V.M. Sialylation in protostomes: a perspective from Drosophila genetics and biochemistry. Glycoconj J. 2009;26(3):313-24.
  2. Timoshenko TV, Perepelkina OV, Markina NV, Revischin AV, Pavlova GV, Poletaeva II, Sukhih GT. Audiogenic epilepsy in mice with different genotypes after neonatal treatments enhancing neurogenesis in dentate gyrus. Bull Exp Biol Med. 2009;147(4):458-61.
  3. Тимошенко Т.В., Полетаева И.Ю., Павлова Г.В., Ревищин А.В, Влияние неонатального введения нейропептида семакса на пролиферативную активность клеток в зубчатой фасции гиппокампа крыс двух генотипов, ДАН, 2009;424:78-80.
  4. Butovskaia PR, Pavlova GV, Martirosian IA, Sukhikh GT, Ryskov AP. Somatic mosaicism in mice detected using the RAPD-PCR method. Mol Gen Mikrobiol Virusol. 2009;(1):3-7.
  5. E.L.Arsenieva, I.V.Kuzmin, E.S.Manuilova, E.V.Novosadova, E.V.Murkin, G.V.Pavlova, V.Z.Tarantul, and I.A.Grivennikov. The production and characteristics oa a mouse’s embryonic stem cell lineage, transfected by the glia neurotrophic factor and gene fused with the green fluorescent protein gene. Acta Nature, 2009 (1): 109- 114.
  6. Olerud J, Kanaykina N, Vasylovska S, King D, Sandberg M, Jansson L, Kozlova EN.Neural crest stem cells increase beta cell proliferation and improve islet function in co-transplanted. murine pancreatic islets. Diabetologia. 2009;52(12):2594-601.
  7. Aldskogius H, Berens C, Kanaykina N, Liakhovitskaia A, Medvinsky A, Sandelin M, Schreiner S, Wegner M, Hjerling-Leffler J, Kozlova EN. Regulation of boundary cap neural crest stem cell differentiation after transplantation. Stem Cells. 2009;27(7):1592-603.

2010:

  1. Revishchin AV, Okhotin VE, Korochkin LI, Pavlova GV. A new population of calretinin positive cells, presumptively neurons, with polymorphous spines in the mouse forebrain. Neurosci Behav Physiol. 2010;40(5):541-52.
  2. Revishchin AV, Okhotin VE, Pavlova GV. New Calretinin-Positive Cells with Polymorphous Spines in the Mouse Forebrain during Early Postnatal Ontogeny. Neurosci Behav Physiol. 2010; 40(8):833-40.
  3. Kanaykina N, Abelson K, King D, Liakhovitskaia A, Schreiner S, Wegner M, Kozlova EN.In vitro and in vivo effects on neural crest stem cell differentiation by conditional activation of Runx1 short isoform and its effect on neuropathic pain behavior. Ups J Med Sci. 2010;115(1):56-64.

2011:

  1. Lopatina T, Kalinina N, Karagyaur M, Stambolsky D, Rubina K, Revischin A, Pavlova G, Parfyonova Y, Tkachuk V. Adipose-derived stem cells stimulate regeneration of peripheral nerves: BDNF secreted by these cells promotes nerve healing and axon growth de novo. PLoS One. 2011 Mar 14;6(3):e17899
  2. Zavyalova E, Golovin A, Reshetnikov R, Mudrik N, Panteleyev D, Pavlova G, Kopylov A. Curr Med Chem.Novel modular DNA aptamer for human thrombin with high anticoagulant activity. 2011;18(22):3343-50.
  3. Павлова Г.В., Канайкина Н.Н., Пантелеев Д.Ю., Охотин В.Е., Рыбалкина Е.Ю., Ревищин А.В. Управление нейральной дифференцировкой стволовых/прогениторных клеток. Стволовые клетки и регенеративная медицина ISBN 978-5-317-03583-9, 2011, стр. 82-102.

2012:

  1. Павлова Г.В., Канайкина Н.Н., Пантелеев Д.Ю., Охотин В.Е., Ревищин А.В. Трансгенные клеточные культуры, синтезирующие нейротрофические факторы, и возможности их применения в терапии. Онтогенез, 2012, т.43, №1, стр. 66-72.
  2. E. Zavyalova, A. Golovin, T. Timoshenko, A. Babiy, G. Pavlova, A. Kopylov. DNA Aptamers for Human Thrombin with High Anticoagulant Activity Demonstrate Target- and Species-Specificity. Current Medicinal Chemistry, V. 19, 36, 2012, in press
  3. G. Pavlova, T. Lopatina, N. Kalinina, E. Rybalkina, Y. Parfyonova, V. Tkachuk, A. Revishchin. In Vitro Neuronal Induction of Adipose-Derived Stem Cells and Their Fate after Transplantation into Injured Mouse Brain. Current Medicinal Chemistry, V. 19, 36, 2012, in press.

2013:

  1. Zavyalova E., Golovin A., Pavlova G., Kopylov A. (2013) Module-Activity Relationship of G-quadruplex Based DNA Aptamers for Human Thrombin. Curr Med Chem. 20: 4836-4843.
  2. Couch Y., Anthony D.C., Dolgov O., Revischin A., Festoff B., Santos A.I., Steinbusch H.W., Strekalova T. (2013) Microglial activation, increased TNF and SERT expression in the prefrontal cortex define stress-altered behaviour in mice susceptible to anhedonia. Brain Behav Immun. 29: 136-146.
  3. Черезов Р.О., Воронцова Ю.Е., Мерцалов И.Б., Куликова Д.А., Симонова О.Б. (2013) Влияние РНК-шпильки, специфичной к гену lawc, на экспрессию перекрывающихся генов комплекса lawc/Trf2 y D. melanogaster. Известия Российской академии наук. Серия биологическая. 2: 133-137.
  4. Куликова Д.А., Мерцалов И.Б., Симонова О.Б. (2013) Гены семейства d4 позвоночных. Онтогенез. 44: 3-9.
  5. Горяйнов С.А., Процкий С.В., Охотин В.Е., Павлова Г.В., Ревищин А.В., Потапов А.А. (2013) О роли астроглии в головном мозге в норме и патологии. Анналы клинической и экспериментальной неврологии. 7: 45-51.
  6. Сдобникова С.В., Ревищин А.В., Павлова Г.В., Гаврилова Б.А., Сдобникова Л.Е., Сурнина З.В. (2013) Возможности иммунофлюоресцентного метода при исследовании сосудистой системы сетчатки и эпиретинальной пролиферативной ткани (экспериментальное исследование). Вестник офтальмологии. 4: 10-13.

2014:

  1. Kust N., Panteleev D., Mertsalov I., Savchenko E., Rybalkina E., Revishchin A., Pavlova G. (2014) Availability of Pre- and Pro-regions of Transgenic GDNF Affects the Ability to Induce Axonal Sprout Growth. Mol Neurobiol. 2014 Jul 3. [Epub ahead of print]
  2. Kust N., Rybalkina E., Mertsalov I., Savchenko E., Revishchin A., Pavlova G. (2014) Functional Analysis of Drosophila HSP70 Promoter with Different HSE Numbers in Human Cells. PLoS One. 9: e101994.
  3. Zavyalova E., Samoylenkova N., Revishchin A., Golovin A., Pavlova G., Kopylov A. (2014) Evaluation of antithrombotic activity of thrombin DNA aptamers by a murine thrombosis model. PLoS One. 9: e107113.
  4. Poletaeva I.I., Surina N.M., Ashapkin V.V., Fedotova I.B., Merzalov I.B., Perepelkina O.V., Pavlova G.V. (2014) Maternal methyl-enriched diet in rat reduced the audiogenic seizure proneness in progeny. Pharmacol Biochem Behav. 127: 21-26.
  5. Сурина Н.М., Ашапкин В.В., Мерцалов И.Б., Перепелкина О.В., Федотова И.Б., Павлова Г.В., Полетаева И.И. (2014) Предрасположенность крыс к аудиогенной эпилепсии после содержания на метилобогащенной диете в период развития. Доклады Академии наук. 454: 615-617.
  6. Белый Ю.А., Терещенко А.В., Шацких А.В., Велибекова Д.С., Ревищин А.В. (2014) Экспериментальное исследование динамик иммуноэкспрессии VEGF- фактора в тканях сетчатки на модели фотоиндуцированного тромбоза ветви центральной вены сетчатки. Офтальмология. 11: 32-38.
  7. Белый Ю.А., Терещенко А.В., Миргородская С.А., Темнов А.А., Семенов А.В., Ревищин А.В., Павлова Г.В., Куст Н.Н. (2014) Разработка и экспериментальное обоснование эффективности методики локального субретинального введения ксеногенных стволовых клеток меченых магнитными частицами. Офтальмология. 11: 45-51.
  8. Манолов А.И., Долгих В.В., Украинцева Ю.В., Завалко И.М., Ревищин А.В., Павлова Г.В., Пронина Т.С., Угрюмов М.В., Дорохов В.Б., Ковальзон В.М. (2014) Изменение двигательной активности и цикла бодрствование-сон на МФТП-модели болезни Паркинсона у мышей. Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 100: 1252-1260.
  9. Темнов А.А., Белый Ю.А., Миргородская С.А., Семенов А.Д., Шацких А.В., Ревищин А.В., Павлова Г.В., Куст Н.Н., Склифас А.Н. (2014) Использование магнитных частиц для фиксации изолированных клеток при субретинальной трансплантации. Трансплантология. 4: 12-20.

2015:

  1. Pavlova G.V., Vergun A.A., Rybalkina E.Y., Butovskaya P.R., Ryskov A.P. (2015) Identification of structural DNA variations in human cell cultures after long-term passage. Cell Cycle. 14: 200-205.
  2. Kust N., Panteleev D., Mertsalov I., Savchenko E., Rybalkina E., Revishchin A., Pavlova G. (2015) Availability of Pre- and Pro-regions of Transgenic GDNF Affects the Ability to Induce Axonal Sprout Growth. Mol Neurobiol. 51: 1195-11205.
  3. Ушакова Н.А., Ковальзон В.М., Бастраков А.И., Козлова А.А., Ревищин А.В., Павлова Г.В., Павлов Д.С. (2015) Способность гомогената жука-чернотелки Alphitobius diaperinus, иммобилизованного на фитоносителе, блокировать развитие экспериментального паркинсонизма. Доклады Академии наук. 461: 358-361.
  4. Гаврилова Н.А., Широков В.Е., Комова О.Ю., Бантыш О.Б., Сабурина И.Н., Ревищин А.В., Павлова Г.В. (2015) Анализ результатов применения Инфликсимаба, PEDF и Ранибизумаба на модели кислород-индуцированной ретинопатии. Вестник Тамбовского университета. Серия: Естественные и технические науки. 20: 539-544.
  5. Юсубалиева Г.М., Левинский А.Б., Зоркина Я.А., Баклаушев В.П., Горяйнов С.А., Павлова Г.В., Мельников П.А., Горлачев Г.Е., Голанов А.В., Потапов А.А., Чехонин В.П. (2015) Проницаемость ГЭБ у здоровых крыс и при экспериментальной глиоме С6 после фракционной радиотерапии головного мозга. Вопросы нейрохирургии им. Н.Н. Бурденко. 3: 15-26.

RU   EN

Поиск

на сайте

в Яндекс

Полезные ссылки

ФАНО

РАН

Совет по науке и образованию

Минобрнауки

Российский Фонд Фундаментальных Исследований

Российский Научный Фонд

eLIBRARY.RU

Классическая и молекулярная биология

Наука и технологии России

Постнаука

N+1

Научная Россия

Элементы

Биомолекула

Мой геном

Blastim

Biohab

Телеканал Наука 2.0

Очевидное-невероятное

Фестиваль науки

Трансгенные животные в фарминдустрии

Практическая молекулярная биология

Biocompare

Подписка на новости

Институт биологии гена РАН